| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 906-1 | ||||
Resumo:A campilobacteriose genital bovina (CGB), cujo agente etiológico é o
Campylobacter fetus subespécie venerealis, é uma doença de transmissão venérea e causa grandes perdas econômicas em várias partes do mundo devido aos problemas reprodutivos. Esta bactéria permanece na cavidade vaginal de vacas através de mecanismos de evasão do sistema imune pela alteração no perfil de expressão das proteínas de superfície, permitindo nova infecção no útero. Essas proteínas de superfície (Surface Array Proteins - Sap) compõem externamente o envelope celular do C. fetus com importante papel na patogênese da CGB. Sabendo-se as características da proteína SapA e das dificuldades nas técnicas de diagnóstico de CGB em uso, o presente estudo objetivou a caracterização de uma proteína de superfície recombinante de C. fetus como potencial antígeno para imunodiagnóstico e vacinas. A proteína recombinante SapAn78 foi expressa com sucesso em Escherichia coli BL21(DE3) pLysS e purificada por cromatografia de afinidade ao níquel em etapa anterior do projeto. As alíquotas purificadas foram avaliadas por SDS-PAGE 12% e as frações que continham a rSapAn78 foram quantificadas por espectrofotometria (NanoPhotometer™ Pearl, Implen) e armazenadas em ultrafreezer -80ºC. Para a caracterização da funcionalidade da proteína recombinante, procedeu-se os seguintes passos: produção e avaliação do soro policlonal anti-rSapAn78, avaliação da resposta imune por ELISA, análise do soro policlonal por Western blot e antigenicidade dos anticorpos contra Campylobacter spp. O soro anti-rSapAn78 produzido em coelhos foi testado quanto à sua capacidade de reconhecimento contra o antígeno homólogo, bem como contra a proteína SapA nativa na superfície bacteriana. A rSapAn78 foi capaz de produzir anticorpos em coelhos que reconheceram especificamente a SapA nativa de C. fetus subsp. venerealis, diferenciando-a de outras espécies de Campylobacter, como C. fetus subsp. fetus e C. sputorum. Esses resultados destacam a rSapAn78 como candidata para o desenvolvimento de um teste sorológico para CGB, o que até então não está disponível comercialmente, e também o potencial desse antígeno para o desenvolvimento de uma vacina baseada em tecnologia recombinante.
Palavras-chave: Campilobacteriose venérea bovina, Campylobacter fetus, proteína de superfície, proteína recombinante Agência de fomento:Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS) e Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES/PROEX). | |||||